本研究利用固相萃取法作為牛奶樣品中三聚氰胺檢測的前處理方法，HPLC 法作為檢測手段。PolycClean X-MCX (60 mg/3 mL)柱凈化效果良好，回收率滿足測試要求，重現(xiàn)性好， 與知名廠商同型號(hào)柱性能相當(dāng)。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物

三聚氰胺 (CAS:108-78-1)

三、應(yīng)用范圍

 本方法適用于食品中三聚氰胺的 HPLC 檢測及確證。

四、參考標(biāo)準(zhǔn)

《GB/T 22388-2008 原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》

五、實(shí)驗(yàn)材料

NuAnalytical PolyClean X-MCX 固相萃取柱 60 mg/3 mL，W 品牌 HLB 固相萃取柱 60 mg/3 mL 。

六、實(shí)驗(yàn)方法

 1、 樣品待測溶液制備

稱取 2.0ｇ試樣(精確至 0.001 g)于 50 mL 離心管中，加入 15 mL 1%三氯乙酸溶液和 5 mL乙腈，超聲提取 10 min，再振蕩提取 10 min，4000 r/min 離心 10 min。上清液經(jīng)三氯乙酸溶液潤濕的濾紙過濾后，用三氯乙酸溶液定容至 25 mL，移取 5 mL 濾液，加入 5 mL 水混勻后做待凈化液。

2、活化

依次用 3  mL 甲醇和 5  mL 水活化。

3、上樣和洗脫

將待凈化液轉(zhuǎn)移至固相萃取柱中。依次用 3 mL 水、3 mL 甲醇洗滌，抽至近干后，用 6mL5%氨化甲醇溶液洗脫。整個(gè)固相萃取過程流速不超過 1 mL/min。

4、重新溶解

洗脫液于 50 ℃下用氮?dú)獯蹈桑瑲埩粑镉?1 mL 流動(dòng)相定容，渦旋混合 1 min，過微孔濾膜后，供 HPLC 測定。

5、HPLC 條件

色譜柱：SuperLu C18 (250×4.6mm，5μm)

檢測器：UV@240 nm

流動(dòng)相： 離子對(duì)試劑緩沖液(準(zhǔn)確稱取 2.10 g 檸檬酸和 2.16 g 辛烷磺酸鈉，加入約 980

mL 水溶解，調(diào)節(jié)PH 至 3.0 后，定溶至 1 L 備用)-乙腈(80:20, v/v)

洗脫方式：等度洗脫

         柱溫：室溫     

         流速：1.0 mL/min            

         進(jìn)樣量：20μL 

七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1、2.5mg/kg 牛奶基質(zhì)中三聚氰胺的添加回收結(jié)果

表 2    W 品牌 MCX 柱 2.5mg/kg 牛奶基質(zhì)中三聚氰胺的添加回收結(jié)果

2、添加水平為 2.5mg/kg 牛奶基質(zhì)中三聚氰胺檢測色譜圖

圖 1    添加水平為 2.5mg/kg 牛奶基質(zhì)中三聚氰胺檢測色譜圖