高效液相梯度洗脫時注意事項如下：

1. 注意溶劑的互溶性。不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相。有些溶劑在一定的比例內互溶，超出一定的范圍后就不會互溶。例如：乙腈和1mol/L的醋酸銨（pH5.5）混合時會產生沉淀。
2. 梯度洗脫對溶劑純度的要求更高以保證其良好的重現(xiàn)性。進行試樣樣品分析前，為辨認溶劑雜質峰必須進行梯度洗脫，因為富集在色譜柱頭上的弱溶劑的質雜會被強溶劑洗脫下來。應用梯度洗脫的溶劑需要徹底脫氣防止其混合時會產生氣泡。

以上就是高效液相梯度洗脫時注意事項，您可以根據實際情況選擇適合您的方案。