色譜柱常見(jiàn)問(wèn)題解答

柱壓升高 色譜柱入U(xiǎn)濾片被流動(dòng)相或樣品中顆粒堵住。

樣品組分在濾片上沉淀堵住濾片。 卸下入口接頭的濾片，使用1：1的硝酸溶液超聲清洗5min，再用水、

甲醇清洗除去水份。

樣品及流動(dòng)相使用0．45μm濾膜除去微量雜質(zhì)。

使用流動(dòng)相作溶劑配制樣品。  

新柱柱效低 柱外死體積大。

樣品在流動(dòng)相中溶解不好，影響傳質(zhì)過(guò)程。 更換連接管，重新連接色譜柱，降低死體積。

使用合適的流動(dòng)相或使用流動(dòng)相溶解樣品。  

舊色譜柱柱效低，分離不好，柱入口床層塌陷。 填料被流動(dòng)相溶蝕而流失。 用同型填料填補(bǔ)柱效可部分恢復(fù)。

對(duì)硅膠質(zhì)填料，流動(dòng)相PH值在2—7范圍內(nèi)，否則可能被溶蝕。  

舊色譜柱柱效低分離不好，有時(shí)出現(xiàn)雙峰。 入門(mén)填料被污染變質(zhì)所致。 用強(qiáng)溶劑沖洗。

刮除被污染的床層，用同型的填料填補(bǔ)柱效可部分恢復(fù)。

污染嚴(yán)重，則廢棄或重新填裝。  

新柱接到儀器上后，柱頭漏液。 柱接頭與儀器之間連接管的壓環(huán)變形量不夠。 用扳手順時(shí)針?lè)较驍Q緊1／4圈直到不漏液為止。  

新柱接到儀器上后，啟動(dòng)儀器沒(méi)有柱壓降。 柱放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)柱內(nèi)充裝的液體己揮發(fā)干。 繼續(xù)開(kāi)泵，用流動(dòng)相將柱內(nèi)氣體置換掉。  

新柱接到儀器上后，檢測(cè)器出口不斷有小氣泡出

現(xiàn)。 ①同上。

② 流動(dòng)相脫氣不徹底特別是MeOH／H20體系由于氫鍵作用很容易出現(xiàn)氣泡。 ①同上。

②配好流動(dòng)相后一定要進(jìn)行脫氣處理。  

新柱接到儀器上后柱壓降不斷增加，甚至超過(guò)儀器的耐壓限。 柱入口濾片被固體顆粒堵塞或被毒

菌堵塞。 更換或清洗柱入口濾片；用0．45μm過(guò)濾膜過(guò)濾流動(dòng)相除去微小顆粒物。  

進(jìn)樣次數(shù)增加柱壓降逐漸增加。 ①樣品中含有不溶于流動(dòng)相的微小顆粒物。

②樣品在流動(dòng)相中析出微小結(jié)晶。 ①用0．45μm過(guò)濾膜過(guò)濾樣品。

②推薦使用流動(dòng)相溶解樣品。  

使用—段時(shí)間后，柱效下降，分離不好。 ①柱填料被流動(dòng)相溶解而流失。

②柱填料被樣品雜質(zhì)污染。 ①推薦使用予柱。如柱床層塌陷，用相同型號(hào)填料填補(bǔ)。

②推薦使用保護(hù)柱或用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱除去污染雜質(zhì)。  

柱使用一段時(shí)間后，柱效下降出現(xiàn)雙峰。 柱入口床層被污染使柱填料變質(zhì)。 用強(qiáng)溶劑沖洗除去雜質(zhì)。  

柱使用—段時(shí)間后，柱效下降，出現(xiàn)峰拖尾。 柱入口床層被污染。 用強(qiáng)溶劑沖洗20-30ml，若效果不明顯應(yīng)廢棄。  

進(jìn)樣量增大與峰面積增加不成正比．即進(jìn)樣量與峰面積不是線(xiàn)性關(guān)系。 樣品在流動(dòng)相中的溶解度小，只有部分樣品被流動(dòng)相沖如色譜柱中而另一部分則沉積在柱人口端。 ①用流動(dòng)相溶解樣品。

②樣品的濃度不宜太大。

④進(jìn)樣量不宜過(guò)大。  

使用緩沖液作流動(dòng)相時(shí)，柱壓降升高很快。 霉菌生長(zhǎng)所致。 ①在流動(dòng)相中加入有毒物質(zhì)或加疊氯化鈉防止霉菌生長(zhǎng)。

②實(shí)驗(yàn)結(jié)束后先用純水后用MeOH各沖洗20-30ml后關(guān)機(jī)。  

用5μm顆粒填料柱時(shí)， 以MeOH／H20作流動(dòng)相柱壓較高。 MeOH與水之間由于氫鍵作用黏度增大。 可用乙腈／水體系使柱壓降低，分離效率更好。  

長(zhǎng)時(shí)間放置的色譜柱，出現(xiàn)雙峰。 柱床層出現(xiàn)干裂。 柱放置時(shí)，最好使用相應(yīng)的溶劑充填好，防止受大的機(jī)械震動(dòng)，如床層干裂應(yīng)廢棄掉。  

流動(dòng)相洗滌強(qiáng)度由弱漸強(qiáng)時(shí)出現(xiàn)很多雜質(zhì)峰。 強(qiáng)溶劑將弱溶劑洗不出的雜質(zhì)沖出來(lái)。 不影響柱的性能。  

柱使用一段時(shí)間后保留值逐漸縮短。 柱中固定相流失所致。 ①更換色譜柱。

②檢查所用的色譜條件是否合適。  

在U V色譜圖中，靠近死時(shí)間處出現(xiàn)負(fù)峰。 ①進(jìn)樣時(shí)壓力波動(dòng)所致。

②樣品溶劑比流動(dòng)相的UV吸收值低。 ①采用閥進(jìn)樣。

②用流動(dòng)相溶解樣品。